Klíčovým rozdílem mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou jsou vlastnosti použité pro separaci proteinů na gelové elektroforéze. 1D gelová elektroforéza separuje pouze proteiny na základě molekulové hmotnosti, zatímco 2D gelová elektroforéza separuje proteiny na základě jejich izoelektrického bodu a molekulové hmotnosti.

Separace proteinů gelovou elektroforézou je důležitou technikou charakterizace proteinů. Proteiny mají různé vlastnosti; proto je separace složitější ve srovnání s DNA separací elektroforézou na agarózovém gelu.

OBSAH

1. Přehled a klíčový rozdíl
2. Co je to 1D gelová elektroforéza
3. Co je 2D gelová elektroforéza
4. Podobnosti mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou
5. Porovnání vedle sebe - 1D vs. 2D gelová elektroforéza v tabulkové formě
6. Shrnutí

Co je to 1D gelová elektroforéza?

1D gelová elektroforéza, také známá jako jednorozměrná gelová elektroforéza, je metoda separace proteinů založená na molekulové hmotnosti. K separaci proteinů dochází hlavně elektroforézou na polyakrylamidovém gelu. Na základě konceptu gelové elektroforézy se molekuly oddělí podle své vlastnosti molekulové hmotnosti a náboje.

Proto, aby byl proteinům poskytnut jednotný náboj, je ošetření dodecylsulfátem sodným (SDS) provedeno před gelovou elektroforézou. SDS denaturuje proteiny a poskytuje jednotný negativní náboj proteinu; když nastane aplikace elektrického pole, proteiny migrují na pozitivní terminál na základě jejich molekulové hmotnosti. Při oddělení se tedy uvažuje pouze o jedné vlastnosti. To je důvod, proč je tato metoda označována jako 1D gelová elektroforéza.

Během 1D gelové elektroforézy jsou proteiny separovány na základě jejich molekulové hmotnosti. V tomto ohledu molekuly s nižší hmotností migrují rychleji v gelu ve srovnání s proteiny s vysokou molekulovou hmotností. Proteiny s vysokou hmotností tak zůstávají blízko jamek.

Co je 2D gelová elektroforéza?

2D gelová elektroforéza nebo dvourozměrná gelová elektroforéza odděluje proteiny na základě dvou vlastností. Dvě vlastnosti jsou isoelektrický bod proteinu a molekulová hmotnost. Tento způsob separace proteinů zvyšuje rozlišení separace proteinů. Izoelektrický bod proteinu závisí na pH, při kterém je protein neutrální.

Při 2D gelové elektroforéze se tedy proteinu nechá běžet na stálém gradientu pH v první dimenzi. Ve druhé dimenzi jsou proteiny separovány pomocí vertikální nebo horizontální elektroforézy na polyakrylamidovém gelu. Proteiny se tak oddělují podle své molekulové hmotnosti ve druhé dimenzi.

Kromě toho tato metoda gelové elektroforézy zvyšuje rozlišení proteinové separace. Separované proteiny jsou proto čistší. Náklady na tuto techniku ​​jsou však mnohem vyšší než jednorozměrná gelová elektroforéza.

Jaké jsou podobnosti mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou?


  • Obě techniky oddělují proteiny.
    Proto jsou důležité při charakterizaci proteinů.

Jaký je rozdíl mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou?

Klíčový rozdíl mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou je v tom, že 1D gelová elektroforéza odděluje proteiny pouze na základě molekulové hmotnosti, zatímco 2D gelová elektroforéza odděluje proteiny na základě izoelektrického bodu a molekulové hmotnosti. V důsledku tohoto základního rozdílu mezi elektroforézou 1D a 2D gelu se také liší rozlišení separace proteinů a náklady na tyto dvě techniky. 2D gelová elektroforéza ukazuje vysoké rozlišení než 1D gelová elektroforéza. 2D gelová elektroforéza je však dražší než 1D gelová elektroforéza.

Níže infographic shrnuje rozdíl mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou.

Rozdíl mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou v tabulkové formě

Shrnutí - 1D vs. 2D gelová elektroforéza

Separace proteinů závisí na mnoha faktorech. 1D gelová elektroforéza odděluje proteiny pouze na základě molekulové hmotnosti. Dvourozměrná nebo 2D gelová elektroforéza však zvyšuje rozlišení proteinové separace. Dále 2D gelová elektroforéza odděluje proteiny na základě isoelektrického bodu a molekulové hmotnosti. Tato data jsou proto důležitá pro následné zpracování proteinů a v oblasti proteomiky. Toto je shrnutí rozdílu mezi 1D a 2D gelovou elektroforézou.

Odkaz:

1. Galeva, Nadezhda a MichailAltermann. „Porovnání jednorozměrné a dvourozměrné gelové elektroforézy jako separačního nástroje pro proteomickou analýzu jaterních mikrosomů potkana: cytochromy P450 a další membránové proteiny.“ Proteomics, US National Library of Medicine, červen 2002, k dispozici zde.

Obrázek se svolením:

1. „Elektroforéza - Naplnění 1D gelových jamek směsí proteinů“ Autor: Jean-Etienne Poirrier - Naplnění 1D gelových jamek směsí proteinů (CC BY-SA 2.0) přes Commons Wikimedia
2. „2D elektroforéza“ Národním zdravotním ústavem - Centrum pro výzkum nanobiologického výzkumu rakoviny, Národní zdravotnický ústav (Public Domain) prostřednictvím Commons Wikimedia